Investigação dos componentes da pele do anuro Boana albopunctata (Spix, 1824) empregando abordagens moleculares e bioquímicas

Abstract

Peptídeos antimicrobianos (PAMs) vêm ganhando cada vez mais destaque no cenário científico atual como uma alternativa na luta contra microrganismos patogênicos resistentes a múltiplos antibióticos (ATBs). O presente estudo teve como objetivo geral investigar a secreção cutânea do anuro Boana albopunctata empregando uma abordagem combinada de técnicas de biologia molecular e de química de peptídeos. A tradução in silico dos cDNAs obtidos indicou 14 precursores diferentes, permitindo a identificação do precursor do PAM Hilina-a1, previamente isolado dessa secreção. Esta técnica foi utilizada em paralelo com técnicas clássicas de bioquímica que permitiram o isolamento e a caracterização de um PAM inédito presente na secreção cutânea de B. albopunctata. A secreção cutânea obtida por meio de estimulação elétrica foi fracionada por RP-HPLC. Três frações apresentaram atividade antimicrobiana acentuada sobre a bactéria Gram-positiva Staphylococcus aureus (ATCC 25923). Estas frações foram analisadas por MALDI-TOF MS. Tal análise permitiu a identificação de dois PAMs já isolados dessa secreção: a Hilina-a1 e a Ceratotoxina-Ha (Ctx-Ha). O terceiro componente identificado é um peptídeo antimicrobiano inédito com massa molecular de 2981,8 Da. Este é constituído por 28 resíduos de aminoácidos (1

FLGAILRIGQALAKTVIPLVTNAIHPKQ28) e se assemelha ao peptídeo antimicrobiano Figainina 2, identificado com o emprego da estratégia de clonagem de cDNAs da pele do anuro Boana raniceps. O novo peptídeo isolado foi nomeado como Figainina 2-Ba e apresentou um amplo espectro antimicrobiano, incluindo atividade sobre bactérias de interesse veterinário, a bactéria Gram-negativa Escherichia coli e a Gram-positiva Staphylococcus aureus, ambos de isolados clínicos veterinários, com valores de CIM iguais a 8 e 32 μM, respectivamente. Além disso, o PAM Figainina 2-Ba apresentou atividade antifúngica contra Candida albicans ATCC 14053 e Cryptococcus neoformans H99 com valores de CIM iguais a 16 e 8 μM, respectivamente. Estes resultados sugerem o PAM Figainina 2-Ba como um bom candidato para o desenvolvimento de novos medicamentos. No presente estudo, também foram avaliados os efeitos antimicrobianos de cinco análogos do PAM Ceratotoxina-Ha, um PAM também identificado na secreção de B. albopunctata. Dentre os análogos do PAM Ctx-Ha, o análogo Ctx Ha-A3 demonstrou boa capacidade antimicrobiana com valores de CIM iguais a 4 μM contra as bactérias multirresistentes de interesse veterinário, indicando ser um promissor agente terapêutico no tratamento dessas afecções. Os resultados deste trabalho enfatizam a importância da combinação de clonagem de cDNAs e estratégias clássicas de purificação de peptídeos, o que permitiu uma melhor compreensão do conjunto de peptídeos presentes na pele do anuro estudado.