Peptídeos antimicrobianos da pele de Physalaemus cicada bokermann, 1966 (Anura, Leiuperinae) : identificação, purificação e propriedades

Abstract

A descoberta dos antibióticos trouxe um grande avanço para a medicina, melhorando a qualidade de vida e promovendo uma queda drástica da mortalidade por infecções microbianas. Mas o seu uso indiscriminado tem conduzido a um processo de retorno à era pré-antibióticos e, mesmo com os diversos recursos tecnológicos atualmente disponíveis, tem havido dificuldades em encontrar novos compostos antimicrobianos que possam sanar a problemática gerada pela resistência dos microrganismos aos antibióticos convencionais. Os anuros possuem glândulas em sua pele que produzem e secretam uma grande variedade de compostos bioativos como alcaloides, esteroides, aminas biogênicas, proteínas e peptídeos. Estas moléculas apresentam uma extensa gama de bioatividades, incluindo antimicrobiana, antiparisítica, imunomoduladora, antiviral e antitumoral. Os peptídeos antimicrobianos (PAMs) presentes na secreção cutânea de anuros têm sido considerados uma opção terapêutica no desenvolvimento de novos agentes antimicrobianos para combater o fenômeno de multirresistência aos antibióticos convencionais. Neste trabalho, foi realizada a purificação e caracterização de quatro novos peptídeos antimicrobianos isolados da secreção cutânea do anuro Physalaemus cicada, espécie endêmica do Brasil. A secreção bruta foi obtida por estimulação elétrica moderada e submetida ao fracionamento por RP-HPLC em coluna C18. As frações eluídas que apresentaram atividade antimicrobiana no ensaio de varredura foram analisadas por MALDI-TOF MS (Autoflex II, Brüker). Quatro peptídeos antimicrobianos foram purificados e suas estruturas primárias foram determinadas por degradação de Edman: Pc24 (1GFRDNLKKIAKDMLGQIAGAVAEKLKPSQ29), Pc26.1 (1GFKDFMKNIVGKVVGAVVEKFKPSQ.NH225), Pc26.2 (1GFKDFMKNMAKNLVEKVAGAVIEKLKPSQ.NH229) e Pc28 (GLVSGIANTLSGLLGRL.NH217). Os peptídeos denominados Pc24, Pc26.1 e Pc26.2 exibiram similaridade significativa com as nattererinas, uma família de PAMs isolada do sapo Physalaemus nattereri. O peptídeo Pc28 não apresentou similaridade relevante com nenhuma das famílas de PAMs já descritas. Os PAMs Pc24 e Pc28 foram produzidos por síntese química e seus efeitos antimicrobianos foram avaliados sobre bactérias e levedura patogênicas. O peptídeo Pc24 mostrou-se ativo sobre as bactérias Gram-negativas testadas com valor de CMIs de 4 M para Escherichia coli e de 16 M para Klebsiella pneumoniae. Já o peptídeo Pc28 exibiu um espectro de ação mais abrangente, mostrando-se ativo sobre as bactérias E. coli e Staphylococcus epidermdis e sobre a levedura patogênica Candida albicans. Em conclusão, o presente trabalho resultou na purificação e caracterização parcial de quatro novos peptídeos antimicrobianos presentes na secreção da pele de P. cicada, um anuro da família Leptodactylidae, espécie endêmica do Brasil e com distribuição na região da Caatinga brasileira. Esses resultados ressaltam a importância de se expandir os estudos acerca do potencial farmacológico dos anuros da fauna brasileira, englobando espécies de outros biomas, como a Caatinga.