Expressão do gene da esfingomielinase de Trichoderma em tabaco (Nicotiana tabacum L.)

Abstract

Doenças de plantas causadas por fungos patogênicos estão entre os principais fatores responsáveis por perdas agrícolas no país. Os estudos sobre controle biológico representam abordagem importante no controle de tais doenças. Entre os microrganismos mais utilizados está o fungo pertencente ao gênero Trichoderma e uma estratégia chave envolve a identificação e expressão dos genes de Trichoderma para permitir a sua utilização como ferramenta biotecnológica no controle de doenças de plantas. Foi demonstrado que o gene que codifica para a esfingomielinase é expresso contra o fungo Fusarium. O objetivo deste trabalho foi o de gerar plantas de Nicotiana tabacum para expressar o gene de uma esfingomielinase de Trichoderma e avaliar resistência a fitopatógenos. Plantas de tabaco foram transformadas via Agrobacterium tumefaciens com um vetor contendo o gene da esfingomielinase sob o controle do promotor constitutivo CaMV35S. Um total de vinte e sete plantas foram geradas. Sementes de 10 linhagens T1 foram plantadas em casa de vegetação e 5 indivíduos por linhagem foram selecionados através da aplicação do herbicida glifosinato a uma concentração de 200 mg / mL. As plantas que não apresentaram nenhuma lesão foram confirmadas para a presença do gene esfingomielinase através de PCR, e, em seguida, utilizadas nos bioensaio. Os Bioensaios para testar resistência ao fungo Sclerotinia scletotiorum mostrou que as linhagens transgênicas não diferiram significativamente do controle. No entanto, quando as plantas foram desafiadas com a bactéria Pseudomonas syringae pv. tabaci, observou-se uma notável diferença entre os transgênicos e o controle. Este estudo deve formar a base para o desenvolvimento de uma estratégia para controle de doenças bacterianas em plantas.