Moléculas pequenas secretadas pelo fungo Cryptococcus neoformans interferem na ativação do inflamassoma NLRP3

Abstract

Cryptococcus neoformans é uma levedura encapsulada capaz de causar doença principalmente em hospedeiros imunocomprometidos. É considerada um patógeno intracelular facultativo por causa de sua capacidade de sobreviver e se replicar no interior de fagócitos, especialmente macrófagos. Esta capacidade é extremamente dependente de vários fatores de virulência expressos pelo fungo, que tornam o macrófago não ativado ou fracamente ativado ineficaz no combate a levedura fagocitada. Estratégias utilizadas pelo macrófago visando prevenir este cenário incluem a piroptose (uma morte celular programada, rápida e altamente inflamatória) e a vomocitose (expulsão não lítica do patógeno do meio intracelular). A ativação do inflamassoma em fagócitos é geralmente protetiva no combate a infecções fúngicas, incluindo na criptococose. Ainda assim, o reconhecimento do C. neoformans por receptores associados ao inflamassoma requer mudanças específicas em sua morfologia ou opsonização da levedura, dificultando assim o funcionamento apropriado desta via durante a infecção. Neste contexto, analisamos o impacto de moléculas secretadas pela cepa selvagem B3501 e o mutante acapsular Δcap67 em um modelo in vitro de ativação canônica do inflamassoma. Nossos resultados mostraram que o meio condicionado derivado de B3501 (CM35) era capaz de inibir a ativação do inflamassoma e eventos dependentes (por exemplo, secreção de IL-1β) de maneira mais robusta que o meio condicionado derivado de Δcap67 (CMCAP), mesmo este efeito sendo independente da presença de GXM. Também demonstramos que macrófagos tratados com meio condicionado se encontravam menos responsivos contra a infecção com a cepa virulenta H99, exibindo menor capacidade fagocítica, aumento em carga fúngica intracelular e na promoção da vomocitose. Adicionalmente, demonstramos que o metabólito Ácido 3-indol lático (ILA) está presente no CM35 e apresenta inibição contra a ativação do inflamassoma NLRP3. Também analisamos o papel de vesículas extracelulares secretadas pelo fungo na inibição da via do inflamassoma. De forma geral, os resultados apresentados mostram que o meio condicionado de uma cepa selvagem de C. neoformans é capaz de inibir uma importante via de reconhecimento e consequentemente inibir funções fungicidas de macrófagos, contribuindo para a sobrevivência fúngica em modelos in vitro, indicando um possível papel importante destas moléculas secretadas durante a infecção criptococócica.