Efeitos da criopreservação na viabilidade de fibroblastos de felinos silvestres

Abstract

A conservação de material genético de animais silvestres em botijões criogênicos, formando os bancos de germoplasma, representa uma alternativa viável para conservação das espécies e uma garantia para manutenção da diversidade biológica. Há uma necessidade de se criar protocolos de criopreservação para os diversos tipos celulares. O objetivo deste estudo é avaliar o melhor protocolo de criopreservação para manutenção da viabilidade de fibroblastos extraídos das espécies de onça preta (Panthera onca), Gato-do-mato (Leopardus tigrinus) e Gato palheiro (Leopardus colocolo) e caracterizar morfologicamente essas células. Os fibroblastos, isolados a partir de biópsias de peles já se encontravam criopreservados, em nitrogênio líquido, a uma temperatura de - 196ºC. Os fibroblastos foram descongelados, e em um primeiro momento do estudo, feita a curva de crescimento, para acompanhamento do potencial de crescimento celular em um período de 8 dias. Nenhuma das espécies atingiu confluência no cultivo, ao final do oitavo dia, porém as culturas apresentaram crescimento exponencial até as primeiras 50 horas e, após isso, houve uma diminuição nos crescimentos. Ao observar as células em microscopia de campo claro e microscopia eletrônica de varredura, foi possível perceber uma diferença morfológica entre os fibroblastos dos três felídeos. As células de L. colocolo apresentavam-se fusiformes e com as características projeções citoplasmáticas comumente encontradas em fibroblastos. Já as células do L. tigrinus são mais esféricas, com ramificações curtas, enquanto as da P. onca são fibroblastos com aparência fusiforme com longas ramificações. Com a microscopia eletrônica de transmissão, foi possível identificar que os fibroblastos estavam com intensa atividade celular, demonstrada pela presença de inúmeras vesículas digestivas, vacúolos e grânulos de secreção. As superfícies das células apresentaram projeções percebida nos outros dois tipos de microscopia. Em relação à criopreservação, não houve diferenças significativas entre as concentrações de 2,5%, 5% e 10% de DMSO para as espécies L. colocolo e L. tigrinus, sendo ambas as concentrações eficientes. Para o material de P. onca, o crioprotetor mais eficiente também foi o DMSO, porém, nas concentrações de 2,5% e 10%. O CryoSOfree™, foi eficiente apenas para a espécie L. colocolo e L. tigrinus. O aprimoramento de protocolos técnicos irá permitir a reprodução direcionada de animais de interesse e este trabalho poderá contribuir na preservação da fauna silvestre tanto brasileira quanto mundial, bem como a otimização dos estudos, em se estabelecendo protocolos que garantam o maior sucesso no cultivo das células.