Investigação de compostos isolados da peçonha da aranha caranguejeira Acanthoscurria natalensis Chamberlin, 1917 e sua caracterização química e biológica

Abstract

A peçonha de aranhas é composta por uma mistura complexa de moléculas, como acilpoliaminas, peptídios e proteínas neurotóxicas e, enzimas, como hialuronidases. A caracterização destas moléculas tem possibilitado o desenvolvimento de diversas aplicações farmacológicas e biotecnológicas. Contudo, poucas moléculas foram estudadas em aranhas do gênero Acanthoscurria, inclusive em Acanthoscurria natalensis. Assim, o objetivo deste estudo foi a investigação de compostos presentes na peçonha de A. natalensis e sua caracterização química e biológica. A peçonha foi fracionada por cromatografia líquida (RP-HPLC) obtendo-se 18 frações principais. O screening de atividades biológicas da peçonha e/ou frações, identificou ação antimicrobiana pronunciada, manutenção da viabilidade celular e redução da produção de óxido nítrico, na fração composta por acilpoliaminas. A peçonha apresentou atividade hialuronidásica correspondente a fração 18 (AnHyal) e nenhuma atividade proteásica e fosfolipásica. A concentração inibitória mínima (CIM) das acilpoliaminas contra Staphylococcus aureus e Escherichia coli variou entre 128 e 256 μM, sem causar hemólise nestas mesmas concentrações. A estrutura química parcial das acilpoliaminas (614―756 Da) sugerida pelo espectro UV e padrão de fragmentação (ESI-MS/MS), compreende uma unidade tirosil ligada a uma cadeia poliamina, contendo ao menos uma espermidina. A caracterização da AnHyal indicou atividade máxima entre pH 4,0 e 6,0 e temperatura entre 30 e 60oC, degradando preferencialmente o ácido hialurônico. O sequenciamento parcial (LC-MS/MS e degradação de Edman) da AnHyal mostrou similaridades para a hialuronidase da aranha Brachipelma vagans e proteína CRISP de Grammostola rosea, com 64% e 79% de cobertura proteica, respectivamente. Análises por 1D e 2D BN-PAGE/SDS-PAGE/zimograma, mostraram que a AnHyal é composta pelas proteínas hialuronidade e CRISP, formando um complexo enzimaticamente ativo. Sua estrutura secundária contém 36,15% de α-hélice e a temperatura de desnaturação (Tm) foi de 46,37 °C, sendo esta irreversível. Em conclusão, este estudo possibilitou a identificação e caracterização parcial de acilpoliaminas com propriedades biológicas que podem contribuir para sua qualificação como possível agente terapêutico. Ainda, a AnHyal mostrou a presença de um complexo proteico enzimaticamente ativo entre as proteínas hialuronidase e CRISP, sendo este descrito pela primeira vez. Estudos adicionais poderão elucidar outras propriedades deste complexo, ampliando as possibilidades de aplicações biotecnológicas.