Técnicas de cultivo in vitro e microenxertia ex vitro visando a eliminação do Cowpea Aphid-Borne Mosaic virus em Maracujazeiro-Azedo

Abstract

O maracujazeiro-azedo (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) é uma das principais frutíferas brasileiras e seu cultivo apresenta boas perspectivas de expansão. O desenvolvimento da cultura tem sido dificultado por doenças, especialmente a doença do endurecimento dos frutos, causada pelo Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). A eliminação de vírus pela cultura de tecidos tem sido uma alternativa viável para muitas espécies e pode contribuir para a propagação vegetativa de genótipos superiores. O presente trabalho foi realizado com o objetivo de estudar a organogênese in vitro em plantas de maracujazeiro amarelo infectadas com o Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) e avaliar o efeito de meios de cultura utilizados sobre o ponto da enxertia na microenxertia ex vitro visando a eliminação do vírus CABMV. No estudo da organogênese foram avaliados cinco acessos: MAR-2003, MAR-2021, MAR-2024, MAR-2048, Rubi Gigante (RG) e quatro fontes de explantes: ápice caulinar, segmento internodal, segmento nodal e fragmento foliar. Foi utilizado para indução o meio MS suplementado por 2 mg.L-1 de 6-benzilaminopurina (BAP). O segmento nodal apresentou melhor desempenho no cultivo enquanto os piores resultados foram obtidos com o fragmento foliar. Os acessos apresentaram comportamento semelhante em relação ao percentual de explantes organogênicos e à produção de brotos. Foram observados em cortes histológicos meristemóides em explantes de nó e ápice. No trabalho envolvendo a eliminação de vírus por microenxertia ex vitro, ápices caulinares provenientes de plantas do acesso MAR-2050 infectadas foram microenxertados em plântulas obtidas pela germinação de sementes e cultivadas em substrato comercial em condição de laboratório. Foram conduzidos experimentos com a microenxertia realizada no hipocótilo e no epicótilo e testados cinco meios de cultura como adjuvantes, aplicados no ponto da enxertia. O índice de pegamento médio foi de 27,22 % quando a microenxertia foi realizada no hipocótilo e 32,22 % quando realizada no epicótilo. Na microenxertia realizada no hipocótilo não houve efeito da aplicação de meios de cultura ou reguladores de crescimento. Na microenxertia realizada no epicótilo o meio MS suplementado com 3% de sacarose, 10 mg.L-1 de tiamina; 1 mg.L-1 de piridoxina; 1 mg.L-1 de ácido nicotínico; 100 mg L-1 de mio-inositol e 2 gL-1 de Phytagel, (meio básico), acrescido de 0,1 mg.L-1 de ácido 3-indolbutírico (AIB) e 1 mg.L-1 de 6-benzilaminopurina (BAP) proporcionou 53,3% de pegamento e foi superior aos demais tratamentos, com exceção do tratamento meio básico suplementado com 2 mg L-1 xvi de BAP. O mesmo tratamento ocasionou maior desenvolvimento das brotações. O inicio da formação da conexão vascular entre o explante e o porta-enxerto foi observada aos 15 dias e estava estabelecida aos 30 dias. A indexação realizada pelo teste ELISA (Enzyme Linked Imunosorbent Assay) indireto aos 80 a 100 dias da microenxertia mostrou que 93 % das plantas testadas não apresentavam vírus detectável. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT

The sour passion fruit plant (Passiflora edulis Sims f. flavicarpa Deg.) is one of the most important Brazilian fruitbearings and its cultivation presents good perspectives of expansion. The culture development has been made more difficult by diseases, specially the fruit hardening disease, caused by the Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV). The virus elimination by tissue culture has been a viable alternative for many species and can contribute to the superior genotypes vegetative propagation. This work was performed with the objective of studying the in vitro organogenesis in yellow passion fruit plants infected with the Cowpea aphid-borne mosaic virus (CABMV) and assessing the effect of the culture medium used over the grafting spot in ex vitro micrografting aiming at eliminating the CABMV virus. In the organogenesis study five accessions were evaluated: MAR-2003, MAR-2021, MAR-2024, MAR-2048, Rubi Gigante (RG) and four sources of explants: cauline apex, internodal segment, nodal segment and foliar fragment. It was used for induction the medium MS supplemented by 2 mg.L-1 6-benzylaminopurine (BAP). The nodal segment presented the best cultivation performance while the worst results were obtained with the foliar fragment. The accessions presented similar behavior in relation to the percentage of organogenic explants and to the production of shoots. It was observed in histological cuts meristemoids in nodal and apex explants. In the work involving the virus elimination through ex vitro micrografting, stem apexes originated from MAR 2050 accession infected plants were micrografted in seedlings obtained through the germination of seeds and cultivation in commercial substract under laboratory conditions. Experiments were conducted with the micrografting performed on the hypocotyl and epicotyl. Five culture media were tested as adjuvant, applied at the grafting spot. The average rate of setting was 27.22 % when the micrografting was performed on the hypocotyl and 32.22 % when performed on the epicotyl. The micrografting performed on the hypocotyl showed no effects with the application of culture media or growth regulators. The micrografting performed on the epicotyl and the MS medium supplemented with 3% sucrose, 10 mg.L-1 thiamine; 1 mg.L-1 pyridoxine; 1 mg.L-1 nicotinic acid; 100 mg L-1 mio-inositol and 2 gL-1 Phytagel, (basic medium), in addition to 0.1 mg.L-1 3-indolbutiric acid (AIB) and 1 mg.L-1 6- benzylaminopurine (BAP) provided 53.3% setting in the micrografting and was superior to xviii the other treatments, excepting the basic medium treatment supplemented with 2 mg L-1 BAP. The same treatment provided larger shoots development. The beginning of the vascular connection formation between the participants was observed within 15 days and was established in 30 days. The indexation performed by the ELISA (Enzyme Linked Imunosorbent Assay) indirect test within 80 to 100 days of the micrografting showed that 93 % of the plants tested did not present detectable virus.