Avaliação biológica da secreção cutânea da rã Leptodactylus ocellatus : peptídeos citolíticos e proteases

Abstract

Cerca de 94% dos peptídeos de secreção cutânea de anfíbios anuros caracterizados até o momento foram isolados de espécies das famílias Bombinatoridae, Hylidae e Ranidae, enquanto os repertórios peptídicos dos anfíbios das outras mais de 40 famílias são, ainda, pouco conhecidos. A família Leptodactylidae, à qual pertence a rã sul-americana Leptodactylus ocellatus, é uma das pouco estudadas no que diz respeito a peptídeos de secreção cutânea, de modo que apenas oito peptídeos de leptodactilídeos haviam sido descritos até então. O presente trabalho resultou na caracterização de dois novos peptídeos da secreção cutânea de L. ocellatus: ocellatins 4 e 5, que possuem, respectivamente, 21 e 17 resíduos de aminoácidos e apresentam atividades antibacteriana e hemolítica. Verificou-se, ainda, a ocorrência de outros componentes hemolíticos na secreção de L. ocellatus, o que indica uma possível necessidade de proteção contra ectoparasitas. Foi, também, realizado um estudo preliminar da relação entre estrutura e atividade dos peptídeos, o qual consistiu na síntese de análogos de ocellatin 4, modificados por substituição, deleção ou inserção de resíduos de aminoácidos, e na avaliação das atividades hemolítica, antibacteriana e antifúngica desses análogos. Finalmente, verificou-se a ocorrência de proteases ativas na secreção de L. ocellatus, por meio de ensaios que utilizaram caseína, gelatina e substratos fluorogênicos para evidenciar a atividade proteolítica. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT

About 94% of all amphibian skin secretion peptides characterized to date have been isolated from species belonging to the families Bombinatoridae, Hylidae and Ranidae, while little is known about the peptide repertoires of frogs from the other more than 40 families. The Leptodactylidae family, which includes the South American frog Leptodactylus ocellatus, is one that has been subjected to few studies of skin secretion peptides, hence only eight leptodactylid peptides had been so far described. The present work has led to the characterization of ocellatins 4 and 5, two new peptides from the skin secretion of L. ocellatus, with 17 and 21 amino acid residues and showing hemolytic and antibacterial activities. The presence of other hemolytic compounds in the secretion of L. ocellatus has been observed and may indicate the need of molecular defense against external parasites. Preliminary studies of the relationship between structure and activity of peptides have been conducted as well, by means of comparing the hemolytic, antibacterial and antifungal activities of synthetic analogs of ocellatin 4 in which the sequence had been altered by substitution, deletion or insertion of amino acid residues. Lastly, we confirmed the occurrence of active proteases in the secretion of L. ocellatus by performing assays that used casein, gelatin or fluorogenic substrates to evidence proteolytic activity.