Diagnóstico molecular e identificação das espécies de Leishmania na leishmaniose viceral canina no Distrito Federal, Brasil

Abstract

A leishmaniose é uma das doenças parasitárias mais relevantes, estando em expansão em áreas urbanas e periurbanas no Centro-Oeste do Brasil. Na verdade, o diagnóstico sorológico é empregado no Brasil para determinar a eutanásia de cães positivos. No presente estudo examinamos a relevância do diagnóstico molecular no controle da leishmaniose visceral canina. Por outro lado, a sorologia positiva não está diretamente relacionada a uma doença ativa. Desta forma, avaliamos cinquenta e oito (58) cães de diferentes regiões do Distrito Federal a partir de abril de 2012 a dezembro 2013 relativa à infecção por Leishmania. Para tanto, os animais foram fornecidos pelo Centro de Controle de Zoonoses, após investigação epidemiológica. Analisamos biópsias de fígado, baço, nódulos linfáticos e medula óssea através de exames parasitológicos (HE imprints e cultura dos parasitas isolados) e moleculares (PCR da região ITS1 do rDNA e da região 3’ UTR do gene da HSP70). A amostra teve mais de 62% dos cães machos e a maioria destes animais tinha pelos curtos e as orelhas caídas. Análise por PCR das biópsias apresentou resultados positivos em 47 (81%) dos animais. As amostras positivas foram de 35 cães sintomáticos (83%) e 12 (75%) de cães assintomáticos. A reação de PCR-RFLP revelou a espécie L. infantum em 47 (100%) das amostras positivas para a PCR. Deste modo, concluiu-se que o diagnóstico molecular é mais sensível e específico para identificar a leishmaniose visceral em cães. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT

Leishmaniasis is one of the most relevant parasitic diseases, being in expansion on urban and periurban areas in Brazil´s Center East. Actually, serological diagnostic is employed in Brazil determining euthanasia of positive dogs. In this study we examined the relevance of the molecular diagnostic in the control of canine visceral leishmaniasis. On the other hand, a positive serology is not directly correlated to an active disease. In this way, we evaluated fifty-eight (58) dogs from different regions of the Federal District from April 2012 to December 2013 concerning Leishmania infection. For this purpose, animals were provided by the Center for Control of Zoonoses, after epidemiological investigation. We analyzed biopsies from liver, spleen, lymph nodes and bone marrow through parasitological (HE imprints and culture parasite isolation) and molecular tests (PCR of ITS1 region of the rDNA and 3’ UTR region of the HSP70 gene). Our sample had more than 62% of male dogs and most of these animals had short hair and dropping ears. PCR analysis of the biopsies showed positive results in 47 (81%) animals. Positive samples were from 35 (83%) symptomatic and 12 (75%) asymptomatic dogs. PCR-RFLP revealed L. infantum in 47 animals (100% of the PCR positive samples). In this way, we concluded that the molecular diagnosis is more sensible and specific to identify visceral leishmaniasis in dogs.