Determinação de amilorida e triantereno em plasma sanguíneo por espectrofluorimetria e calibração de segunda ordem

Abstract

A calibração de segunda ordem é aplicada a dados trilineares, que possuem três dimensões. Os dados espectrofluorimétricos possuem essa característica e têm sido analisados por modelos de segunda ordem, como UPLS e PARAFAC, por exemplo. O uso de ferramentas quimiométricas associadas a técnicas mais simples vem sendo uma alternativa perante técnicas mais sofisticadas e matrizes complexas, quando geralmente usa-se cromatografia. O uso de espectrofluorimetria na determinação de fármacos que apresentam fluorescência natural, como o triantereno e a amilorida, parece simples à primeira vista, mas torna-se complicado em fluídos biológicos, pois esses também possuem fluorescência natural. O uso de quimiometria possibilita essa determinação sem exaustivas etapas de extração ou pré-concentração do analito. A importância de se determinar fármacos diuréticos em amostras biológicas abrangem análises de doping, estudos clínicos e farmacocinéticos. Os analitos de interesse apresentam baixa faixa terapêutica, e por esse motivo geralmente são determinados por métodos cromatográficos. O presente estudo propõe uma precipitação das proteínas plasmáticas com acetonitrila, o que reduz significativamente a intensidade de fluorescência do plasma sanguíneo, mas não a elimina. Por esse motivo, a regressão univariada não é capaz de estimar bons resultados. O método da adição de padrão é usada a fim de diminuir o efeito de matriz, mas não é suficiente para estimar bons resultados na regressão univariada. Visando determinar amilorida e triantereno em plasma sanguíneo por espectrofluorimetria, dois modelos de segunda ordem são otimizados, o PARAFAC e o UPLS, sendo obtidas boas estimativas com a calibração de segunda ordem. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT

The second order calibration is applied to trilinear data, which have three dimensions. The espectrofluorimetrics data have this characteristic and has been analyzed by second order models as UPLS and PARAFAC, for example. The use of chemometrics tools associated with simplest techniques is an alternative before more sophisticated techniques and complex matrices, when chromatography is usually used. The use of spectrofluorimetry for the determination of drugs that fluoresce naturally, as triamterene and amiloride, seems simple at first glance, but becomes complicated in biological fluids, as these also have natural fluorescence. The use of chemometrics enables this determination without exhaustive extraction steps or preconcentration of the analyte. The importance of determining diuretic drugs in biological samples include doping analyzes, clinical and pharmacokinetic studies. The analytes of interest have low therapeutic range, and for that reason are usually determined by chromatographic methods. This study proposes a plasma protein precipitation with acetonitrile, which significantly reduces the fluorescence intensity of blood plasma, but does not eliminate it. For this reason, univariate regression is not able to estimate good results. The standard addition method is used to reduce the matrix effect, but it isn’t sufficient to estimate good results in univariate regression. To determine amiloride and triamterene in blood plasma by spectrofluorimetry, two second order models are optimized, PARAFAC and UPLS, being obtained good estimates with second-order calibration.