Influência de sistemas de refrigeração sobre a qualidade do sêmen ovino criopreservado em palhetas

Abstract

O presente estudo avaliou diferentes sistemas de refrigeração do sêmen ovino, através da aferição e comparação das curvas obtidas assim como seus efeitos sobre a qualidade espermática. Foram avaliados a motilidade, vigor, defeitos morfológicos, viabilidade e estado acrossomal através da coloração dupla trypan-blue/giemsa, ao final dos 90 min de refrigeração, e após a descongelação. Para as análises pós-descongelação foram utilizados os mesmos parâmetros acrescidos da avaliação da integridade da membrana plasmática (IMP) visualizada através das sondas fluorescentes IP e DIC em microscopia de fluorescência e da avaliação do teste de exaustão ao final quatro horas de incubação do sêmen a 37ºC. A refrigeração do sêmen foi realizada em refrigerador doméstico e em balcão, a fim de se controlar a queda de temperatura dos dois equipamentos, as palhetas foram dispostas entre bolsas plásticas contendo água aquecida a 32ºC, constituindo quatro sistemas RS (refrigerador sem bolsa), RC (refrigerador com bolsa), BS (balcão sem bolsa) e BC (balcão com bolsa). Os diferentes protocolos resultaram quatro taxas médias de refrigeração -1,4ºC/min, -0,4ºC/min, - 2,9ºC/min e -0,45ºC/min, para RS, RC, BS e BC; respectivamente. Após a refrigeração do sêmen observou-se diferença significativa entre os tratamentos no parâmetro motilidade espermática (P<0,05), com o tratamento BS apresentado a menor percentagem de células móveis (58,1%). As percentagens de espermazóides vivos com acrossoma íntegro e mortos com acrossoma íntegro apresentaram diferença significativa entre os tratamentos (P<0,05), o tratamento BS obteve a menor média (85,3%) de vivos íntegros e também a maior média de mortos íntegros (14,1%) diferindo dos demais ao final da refrigeração. Houve diferença significativa na percentagem de defeitos morfológicos após a refrigeração (P<0,05), sendo que o tratamento BS foi o que apresentou maior média (15,4%) de defeitos, os sistemas RC (11,5%) e BC (11,1%) apresentaram as menores médias, o RS (13,6%) não diferiu dos demais. Para os demais parâmetros espermáticos pós-refrigeração não foram observadas diferenças significativas. Em relação ao sêmen pós-descongelação, para todos os parâmetros avaliados não foram observadas diferenças significativas. Ao final do teste de exaustão, após quatro horas de incubação, também não foram observadas diferenças significativas entre os tratamentos. Com base nos resultados concluiu-se que a as diferentes taxas de refrigeração, afetaram o sêmen no final da fase de refrigeração. As avaliações pós-descongelação não evidenciaram diferenças significativas entre os protocolos de refrigeração ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT

This study aimed to evaluate the influence of different types of cooling systems upon the post-thawing quality of ram semen, through the measurement and comparison of cooling rates. The parameters were motility, vigor, morphology damages, viability and acrossomal state through the use of Trypan-blue/giemsa coloration, at the end of the 90 minutes of cooling and post-thawing. With regard to the analysis of post- thawed semen, the same parameters were used, in addition to the assessment of the integrity of the plasmatic membrane using de fluorescent stains propidium iodide (PI) and carboxifluorescein diacetate (CFDA), and the resistant test through incubation of semen at 37º C during 4 hours. The semen refrigeration was carried out in a domestic refrigerator and in a horizontal freezer. To control the fall of temperature of the two equipments, the straws were disposed between plastic bags containing water at 32ºC, creating four combinations of cooling procedure: RS (refrigerator without bag), RC (refrigerator with bag), BS (horizontal refrigerator without bag) and BC (horizontal refrigerator with bag). The different protocols resulted in four cooling rates: -1.4ºC/min, -0.4ºC/min, -2.9°C/min and -0.45ºC/min, for RS, RC, BS and BC, respectively. At the end of cooling period, there was a significant difference among the treatments on the sperm motility (P<0.05), the BS treatment showed the lowest percentage of sperm motility (58.1%). The percentage of live spermatozoa with intact acrosome was different (P<0.05) among treatments, the BS treatment had the lower mean (85.3%). The percentage of dead spermatozoa with intact acrosome was different (P<0.05), the BS treatment had the highest mean (14.1%). There was a significant difference on the percentage of morphological defects at the end of cooling (P<0.05); the BS treatment had the highest mean (15.4%), the systems RC (11.5%) and BC (11.1%) resulted in the lower means and the RS (13.6%) was identical to others. To the other sperm parameters post-cooling, there were not differences. Regarding frozen-thawed semen, there were no parameters with differences. At the end of the resistant test period, there was no significant difference among the treatments. On basis of these results, it was concluded that the different cooling rates only affected ram semen at the end of cooling stage. The evaluation of frozen-thawed semen does not show any effect on the differents cooling protocols