Diagnóstico de Babesia bigemina por reação em cadeia da polimerase (PCR) utlizando os primers GAU6 e GAU7 para um fragmento de SSrRNA

Abstract

O presente trabalho teve como finalidade avaliar o protocolo da reação cm cadeia da polimerase (PCR) com prímers GAU6 e GAU7 para amplificação específica de um fragmento do gene que codifica para SS rRNA de B. bigemina com amostras de sangue de bovino contendo os isolados de Babesia bigemina, Babesia bovis e Anaplasma marginale. Foram realizadas 40 reações para as amostras de sangue que continham hemoparasitos, sendo 14 reações de PCR para Babesia bigemina, 12 para reações para Babesia bovis e 14 para Anaplasma marginale. Para a extração do DNA das amostras de sangue, seguiu-se o protocolo de extração do kit comercial GFX™ Pharmacia Biotechâ; as amostras foram submetidas à reação do PCR previamente descrita por LINHARES et al. (2000). Os resultados obtidos demonstraram ser os primers GAU6 e GAU7 específicos para Babesia bigemina, não apresentando reação positiva para os parasitos Babesia bovis e Anaplasma marginale, bem como o DNA extraído de sangue de bovino livre de infecção. ______________________________________________________________________________ SUMMARY

The present study was carried out to evaluate the polymerase chain reaction (PCR) protocol with GAU6 and GAU7 primers for the SSrRNA of Babesia bigemina in cattle blood containg Babesia bigemina, Babesia bovis and Anaplasma marginale. Forty reactions were carried out for blood samples with haemo-parasites, 14 PCR for Babesia bigemina, 12 for Babesia bovis and 14 for Anaplasma marginale. DNA was extracted from the blood samples using the commercial GFX™ Pharmacia Biotechâ, and then the PCR protocol as described by LINHARES et al. (2000). The results show that the GAU6 and GAU7 primers are specific for Babesia bigemina and did not show a positive reaction for the Babesia bovis and Anaplasma marginale parasites. No reaction was obtained with DNA extracted from blood of healthy cattle.