Efeitos da rosiglitazona, agonista do receptor gama ativado por proliferadores peroxissomais, sobre a proliferação e expressão do TGFb1 em cultura primária de células da polpa dentária humana

Abstract

Estudos recentes sugerem que o receptor gama ativado por proliferadores peroxissomais (PPAR) e seu agonista, a rosiglitazona, podem modular a expressão de moléculas relacionadas com eventos imuno-inflamatórios em células da polpa dentária humana, indicando, assim, a possibilidade de se utilizar agonistas deste receptor nuclear (RN) no controle da inflamação pulpar. Entretanto, eventos igualmente importantes no processo de reparo do complexo dentino-pulpar, tais como proliferação e expressão de genes envolvidos com a formação de dentina terciária, não foram abordados nesses estudos. Diante disso, a proposta do presente trabalho foi investigar o efeito da rosiglitazona sobre a proliferação celular e sobre a expressão do TGF1, em modelo experimental de cultura primária de células da polpa dentária humana. Para cumprir com os objetivos propostos, foram estabelecidas culturas primárias de polpas obtidas de terceiros molares inclusos e hígidos, com a raiz ainda em formação, extraídos por indicações clínicas. Os efeitos da rosiglitazona sobre a proliferação celular foram avaliados por meio de ensaio de 3incorporação de timidina marcada radioativamente com trítio ([H]-timidina) e os efeitos sobre a expressão do gene que codifica o TGF1 foram avaliados por meio da técnica de amplificação por reação em cadeia da polimerase em tempo real/quantitativa (RT-PCRq). Os resultados dos ensaios de proliferação demonstraram que o tratamento com rosiglitazona durante 24 horas diminuiu a proliferação das células em cultura, enquanto que o tratamento durante 72 horas não alterou a proliferação celular. Os resultados dos ensaios de expressão gênica sugeriram que o tratamento com rosiglitazona durante 7 dias não alterou a expressão do gene que codifica o TGF1, no entanto, após 14 dias de tratamento com o ligante, sua expressão aumentou. Em conjunto os resultados dos ensaios de proliferação e de expressão gênica sugerem que a rosiglitazona possa estar envolvida com a ativação de vias de diferenciação ou de vias apoptóticas. No entanto, investigações adicionais são necessárias para melhor esclarecer o papel do PPAR na fisiopatologia pulpar. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT

Several studies have suggested that peroxisome proliferator-activated receptor gamma (PPARγ) and his agonist, rosiglitazone, can regulate the expression of immune-inflammatory related molecules in human dental pulp cells. The authors have raised the possibility of using PPAR agonists as an option in pulpal inflammation treatment. However, others events involved in the dental-pulp complex repair process, such as cell proliferation and gene expression of molecules related with the tertiary dentin formation, were not assessed in these studies. Therefore, the aim of this study was to investigate the effect of rosiglitazone on cell proliferation and on the TGF1 gene expression in primary human dental pulp cells culture. In order to perform the purposes of the present study, primary cultures were established from pulp tissue obtained from non-erupted, caries-free third molars, which were extracted due to therapeutic reasons. Effects of rosiglitazone on cell proliferation were 3evaluated by tritium labeled thymidine incorporation assay ([H]-thymidine) and effects on TGF1 gene expression were evaluated by quantitative polymerase chain reaction (RT-PCRq). The proliferation assays showed that treatment with rosiglitazone for 24 hours decreased cell proliferation, while after 72 hours treatment no changes in cell proliferation where observed when compared with controls. Gene expression results suggested that treatment with rosiglitazone for 7 days did not modify TGF1 gene expression, however, after 14 days ligand treatment, an increase in the expression was observed. Proliferation and TGF1 gene expression results suggest that rosiglitazone might be involved in differentiation or apoptotic pathways activation in the primary pulp cell cultures studied. However, further investigations are required to better understand the role of PPAR in dental pulp pathophysiology.